一个案例,用流式快速分析腹膜透析患者是否

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如果没有有效的抗菌疗法，腹膜透析（PD）相关的腹膜炎就可能会迅速危及生命。然而，这些病例常规使用基于培养的微生物学检查，所以很少能快速给临床医生提供指导，从而导致临床上一般都用广谱抗生素覆盖。而且，有些腹透中心的培养阴性腹膜炎发生率接近20％。这两个现状的存在，说明需要有新的方法来使临床医生及时做出决策，来改善患者的预后。

PCR方法检测病原菌，在PD排出液上效果较差，这可能是由于存在抑制因素，例如纤维蛋白和降解的DNA。

澳大利亚的KieranT.Mulroney于年2月6日在PeritonealDialysisInternational:JournaloftheInternationalSocietyforPeritonealDialysis杂志上发表了一个案例，展示了流式的威力，在收到样品后2小时内对细菌、人白细胞和其他临床相关颗粒进行了检测和计数。

案例里面的这名老年男性长期腹透，因腹部疼痛、发烧、腹透排出液浑浊而入院，近期曾因芽孢杆菌引起的腹膜炎而被医院的急诊科。所以此次入院之后，临床医生就凭经验腹膜内注射万古霉素和庆大霉素，而未收集任何样品进行培养。用药后，才又引流了一袋排出液，送往实验室进行显微镜检查、培养和敏感性（MC＆S）检查，并告知实验室已经使用了抗生素。因此，排出液同时还进行了流式细胞术检测。

流式步骤

将排出液倒入2个50mL无菌Falcon离心管中，分别以xg、xg和xg离心三次，依次去除肉眼可见的纤维蛋白沉积物、离心出人白细胞、沉淀细菌。将白细胞重悬在预热的（37°C）DMEM培养基中，将细菌重悬于37度预热的Mueller-HintonBroth[MHB]培养基。两种培养基中均含20％v/v胎牛血清（FCS）。

白细胞管，用0.1μm过滤的Hank平衡盐溶液（HBSS）洗涤，接着与MouseAnti-HumanCD45APC-H7孵育30分钟，洗涤，用10μMSYTO9染色10分钟，然后上机分析。

细菌管用0.1μm过滤的HBSS洗涤后，用10μMSYTO9和2μL/mLFixableLive/DEADNearIR（FNIR）染色30分钟，然后上机分析。

流式图形

首先是分析白细胞管，可以看出白细胞虽然少，但还是比较明显的分群：

在细菌管，按照前述门的位置排除掉右上的白细胞之后，对细菌进行分析，计数SYTO9＋的细菌，即可得到细菌数量为1.21×10E6/ml。

这样漂亮而直观的结果，只需要2个小时就能完成。虽然不能告诉临床医生具体什么细菌，但是在第一时间给了临床医生一个用抗生素的依据。